目的 采用RNA干扰(RNAi)技术沉默转化生长因子β1(TGF-β1)基因,观察RNAi的基因沉默效应及对人膀胱癌细胞株(EJ细胞株)中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 构建基因TGF-β1特异性小干扰RNA (siRNA)表达载体,反转录(RT)-PCR及ELISA筛选出抑制效率最高的靶序列,分成EJ细胞组、对照组(TGF-β1组)、重组质粒组(TGF-β1siRNA表达载体组)3组转染,Western印迹检测各组细胞VEGF蛋白表达水平.结果 成功构建基因TGF-β1特异性siRNA表达载体,RT-PCR及ELISA筛选出最佳抑制效果的序列[TGF-β1相对mRNA表达水平为0.92-0.19;ELISA检测的蛋白表达水平为(50 ±6) pg/ml];转染后各组的VEGF蛋白表达水平为EJ细胞组(0.86 ±0.18) pg/ml,对照组(1.15 ±0.29) pg/ml,重组质粒组(0.45 ±0.16) pg/ml,重组质粒组明显低于EJ细胞组和对照组(均P＜0.05).结论 抑制TGF-β1基因能下调VEGF基因的表达,TGF-β1基因可能通过诱导VEGF基因的表达实现对膀胱肿瘤血管生成的调控.
作者：廖勇；邱明星；刘竞；黄建林
来源：中华医学杂志 2014 年 94卷 16期
