目的 研究Roundabout1(Robo1)-CAR-NK92细胞在体外对神经胶质瘤细胞U87-MG及神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的体外杀伤以及探讨白细胞介素-15 (IL-15)、IL-21和地塞米松对Robo1-CAR-NK92细胞增殖、活性和杀伤的影响以优化培养方案.方法 用慢病毒转染的方法构建Robo1-CAR-NK92细胞后分选扩增,并用流式细胞术检测阳性率.用流式细胞术的方法检测U87-MG及SH-SY5Y细胞表面Robo1的表达.用CCK-8试剂盒和动态活细胞成像的方法检测Robo1-CAR-NK92及NK92细胞对靶细胞的体外杀伤.用流式多重微珠阵列法检测杀伤过程中分泌的细胞因子含量.用锥虫蓝染色的方法检测经25 ng/ml的IL-15,25 ng/ml的IL-21和(或)50 nmol/L的地塞米松处理3d后的Robo1-CAR-NK92及NK92细胞的计数及活性率.结果 构建Robo1-CAR-NK92细胞并经分选扩增后检测阳性率为98.89％.流式细胞术检测结果显示,Robo1在U87-MG及SH-SY5Y细胞上表达的阳性率分别为88.14％,99.75％.Robo1-CAR-NK92细胞对靶细胞的杀伤率明显高于NK92的杀伤率(P＜0.05).Robo1-CAR-NK92细胞在杀伤U87-MG细胞过程中分泌的IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ较NK92细胞明显增多(P＜0.05).IL-15能促进Robo1-CAR-NK92的增殖和活性而IL-21则起相反作用.IL-21、IL-15+ IL-21能增强NK92和Robo1-CAR-NK92细

作者：曲玥；毕建忠

来源：中华医学杂志 2018 年 98卷 11期