目的 建立一种简便快速检测细胞内整体DNA甲基化水平的方法,以用于临床甲基化诊断.方法 采用高效毛细管电泳技术,以pH 9.6的48 mmol/L碳酸氢钠溶液[含60 mmoL/L十二烷基硫酸钠(SDS)]为分离缓冲液,检测波长为256 nm,在20 kV电压下,0.7 psi压力进样时间5 s,对2'-脱氧胞苷(dC)、5-甲基-2'-脱氧胞苷(mdC)、2'-脱氧腺苷(dA)、2'-脱氧胸苷(dT)、2'-脱氧鸟苷(dG)5种物质进行分离.在此基础上检测氨甲蝶呤(MTX)诱导的肺癌A549耐药细胞株内整体DNA甲基化水平.结果 通过不断优化分离缓冲液中SDS浓度(40、60、80 mmol/L)、pH值(9.4、9.6、9.8)、分离电压(15、17、19、20、22 kV)、进样时间(5、10、15、20、30 s)和毛细管温度(15、20、25、30℃),建立高效毛细管电泳检测细胞内整体DNA甲基化水平的方法,可在10 min内实现dC、mdC、dA、dT、dG的完全分离,其日内变异系数(CV)<0.2
作者：李明；胡世莲；何晓东；陶绍能；董林；朱园园；吴剑锋；沈佐君
来源：中华检验医学杂志 2009 年 32卷 2期
