目的制备人类白蛋白来源一段小分子多肽的多克隆抗体,建立毛细管电泳检测该小肽方法,为临床早期诊断GVHD提供新的手段.方法人工合成序列为LVRYTKKVPQVSTPTL的16个氨基酸残基的人来源多肽,按兔100μg/kg体重肽抗原标准制成免疫原.按常规方法,每次取2.5 ml抗原悬液,在脊柱两侧皮下和腹股沟处多点注射,分3次免疫动物,制备多克隆抗体.采用异硫氰酸酯荧光素(FTTC)标记小肽抗原,用获得的抗体通过LIF-CE-IA建立该肽的检测方案.结果获得该肽的多克隆抗体的效价为1∶1000,且它与正常人血清、尿液以及牛血清间没有交叉反应;标记抗原出峰时间为5.93 min,抗原-抗体复合物分离时间为6.47 min,所建立的检测方法的线性范围为16～512 ng/ml,最低检出限为10 ng/ml.结论实验所获得的多克隆抗体具有较高的滴度和特异性,所建立多肽的检测方法简便、快速,可为今后临床早期诊断GVHD提供一种新的手段.
作者：沈佐君；何晓东；伊茂礼；孙自敏
来源：中华检验医学杂志 2010 年 33卷 10期
