目的 建立一种基于磁珠法的快捷、简便、高纯度血液HBV DNA提取方法(以下简称磁珠法),为用于临床自动化定量检测的核酸诊断试剂研发提供技术支持.方法 用科华生物公司内部5份HBV强阳性血清标本,先通过磁珠的磁性、悬浮性、HBV DNA提取效果等对4种磁珠(A～D磁珠)进行筛选,并对磁珠用量(1 ～ 1.75μl/ml)、裂解液pH值(4 ～9)、洗涤液中是否加入乙醇和洗脱液带磁珠扩增等条件进行系统优化；并对建立的磁珠法线性范围、精密度、灵敏度、抗污染和抗干扰能力等技术性能进行评价.然后,分别用磁珠法与国内成熟的煮沸法定量检测100份HBV血清标本,用磁珠法与国际“金标准”Roche COBAS TaqMan Test(以下简称Roche法)定量检测50份HBV血清标本,并比较分析3种方法的相关性.结果 通过实验条件优选试验确定超顺磁A磁珠在物理性能和DNA提取效果都优于其他3种磁珠,磁珠最佳使用量为1.25 μl/ml,裂解液最佳pH值为7～8,洗涤液中可去除乙醇成分,并可直接带磁珠进行扩增反应.通过平行检测5份公司内部HBV强阳性血清标本以及梯度稀释的血清标本确定磁珠法的线性范围为4×101 ～4 ×108 IU/ml,煮沸法为4×102 ～4×108 IU/ml;磁珠法检测灵敏度为30 IU/ml,高于煮沸法(100 IU/ml)；在低浓度HBV血清标本检测中,磁珠法的精密度(CV
作者：陆佳飞；周科隆；王缦
来源：中华检验医学杂志 2012 年 35卷 9期
