目的 研究建立同时进行HBV DNA定量与基因分型检测的双重分子信标实时PCR法(以下简称“定量与分型PCR法”),并探讨其应用价值.方法 构建B、C基因型重组质粒作为标准品,通过设计B、C基因型特异性引物和分子信标(B、C基因型分子信标5’端分别标记FAM和Hex荧光基团),建立在1个反应体系中同时定量与分型PCR法.然后,用10倍梯度稀释的B、C基因型标准品(103 ～ 1011 kIU/L)评价其检测线性范围和灵敏度；用丙型肝炎病毒感染者、单纯疱疹病毒感染者、人类乳头瘤病毒感染者、健康志愿者血清各5份评价其检测特异性；用高、中、低3份不同浓度的B、C基因型质粒标准品(108、106、104 kIU/L)进行同批次和不同批次各10次重复检测,分别计算批内及批间Ct值的变异系数(CV)评价其检测重复性.然后,以湖南圣湘生物科技有限公司HBV核酸定量测定试剂盒为HBV DNA定量参照方法,申友公司HBV基因分型试剂盒为HBV基因分型参照方法,同定量与分型PCR法平行检测132例HBV感染者血清标本,评价自建定量和分型PCR法的准确性.最后,将132例HBV感染者分为无症状携带组(21例)、慢性乙型肝炎组(77例)、肝硬化组(25例)、肝癌组(9例),分析评价基因型、疾病进展的不同阶段与DNA载量间的相关性.结果 用自建定量与分型PCR法检测B、C基因型的灵敏度均为10
作者：王炜；陈晓；江凌；刘灿；商红艳；欧启水；杨滨
来源：中华检验医学杂志 2013 年 36卷 4期
