目的 探讨应用生物信息学技术对人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)分子进行B细胞表位的预测的可行性,筛选出具有诊断价值的线性表位分子,构建并表达重组线性多表位抗原肽并进行免疫原性鉴定.方法 2015年7月南京医科大学第二附属医院检验科查询GenBank中NGAL氨基酸序列,利用Predicted、ABCpred、BepiPred、BcePred及Lasergene软件进行B细胞线性表位预测,构建、原核表达预测出的可能表位,通过免疫印迹实验筛选出可与现有NGAL多克隆抗体反应的单表位抗原,最后将获得的单表位抗原构建、表达出多表位抗原肽,并对其进行免疫反应性鉴定.结果 综合预测得出了8个可能的表位,通过构建pET32a-N1～N8原核表达载体,经表达、纯化、免疫印迹筛选,获得了3条具有较强抗原性的表位,随后构建出的多表位原核表达载体pET22b-Ngal_MEP1,获得了可溶性表达的融合蛋白,通过Ni2+亲和柱纯化,成功纯化出了融合蛋白.免疫印迹试验表明,该重组融合蛋白具有较强抗原性.结论构建的NGAL多表位线性抗原肽在原核表达系统中能获得高效可溶性表达,并具有较强免疫反应性,可用于后续抗体制备.
作者：章祥浩；李智洋；许红攀；夏艳艳；庞露；司进
来源：中华检验医学杂志 2016 年 39卷 5期
