目的 制备白细胞介素12(IL-12)锚定修饰肿瘤源性外核体(EXOs)的肾癌疫苗,探讨其体外对肾癌细胞特异性杀伤效应.方法 将精基化磷脂酰肌醇(GPI)信号肽序列与IL-12基因融合,构建真核双表达质粒pBIG,应用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测融合蛋白(GPI-IL-12)在肾癌细胞中的表达.用超滤和蔗糖/重水密度梯度离心法分离EXOs,透射电镜鉴定其形态.采用Western blot检测其标志性分子热休克蛋白70(HSP70)、细胞间黏附分子(ICAM-1)、肾癌特异性抗原G250和GPI-IL-12的表达.应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定EXOs负载IL-12的量,干扰素γ(IFN-γ)释放试验检测IL-12修饰EXOs(EXO-IL-12)的功能,羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)和碘化丙啶(PI)双标的流式细胞仪分析其对肾癌细胞的诱导杀伤效应.结果 EXOs为类圆碟形、双层膜结构,直径30～80nm,表达HSP70、ICAM-1、G250和GPI-IL-12.ELISA测定结果显示,10μg/ml EXOs含约(80.0±9.6)pg/ml的IL-12.EXO-GPI-IL-12疫苗能显著地促进T淋巴细胞分泌IFN-γ,在体外对肾癌细胞的特异性杀伤率为53.7
作者：张尧；吴小侯；陈刚；罗春丽；张家摸
来源：中华肿瘤杂志 2010 年 32卷 5期
