目的 构建溶瘤性单纯疱疹病毒( oHSV)易感的C57/BL小鼠黑色素瘤细胞系B16RHSV,同时仍保留其在小鼠体内诱导肿瘤生长的能力.方法 以人黑色素瘤细胞系A375的基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应(PCR)扩增出疱疹病毒侵入介体(HVEM),将扩增产物克隆到pGEM-T Easy载体中并测序.将测序正确的HVEM基因克隆入pcDNA3质粒载体,产生pcDNA3-HVEM.以pcDNA3-HVEM质粒载体转染C57/BL小鼠黑色素瘤细胞系B16-F10,使用含有GG418的完全培养基筛选可能的阳性克隆,并通过免疫磁珠筛选出表达HVEM的细胞,命名为B16RHSV.用表达绿色荧光蛋白(GFP)的oHSV( oHSVGFP)与B16RHSV细胞体外共培养,观察细胞病变效应和GFP的表达情况.分别以相同剂最的B16-F10和B16RHSV细胞接种于C57/BL小鼠右侧背部皮下,观察这两种细胞诱导小鼠体内形成肿瘤的能力.结果 在荧光显微镜下可观察到B16RHSV细胞表达绿色荧光并出现细胞病变效应,证明B16RHSV细胞能够被oHSV感染并在细胞内繁殖,而其亲代细胞B16-F10则不能.B16RHSV和B16-F10细胞接种于小鼠5d后,两组小鼠均可观察到肿瘤生长,且肿瘤生长情况基本一致.用oHSVGFP治疗两种细胞的荷瘤鼠,仅在B16RHSV细胞荷瘤的小鼠体内显示出明显的溶瘤效应.结论 构建的B16RHSV是对oHSV易感、保持体内成瘤性的小鼠黑色素瘤细胞

作者：庄秀芬；周爱萍；施桂兰；韩香萍；李洁；张郁；张友会；张叔人；刘滨磊

来源：中华肿瘤杂志 2012 年 34卷 3期