目的 探讨建立人真皮微血管内皮细胞的缺氧后处理模型的方法.方法 采用酶消化加磁珠分选的方法,获得人真皮微血管内皮细胞,用5％ ECM培养基培养,取第6～8代细胞备用,在进行缺氧处理后复氧前,将细胞进行3次一定时间的缺氧/复氧交替处理;将细胞接种于6孔板,1个6孔板为1组,共6组.1组:不作任何处理;2组:缺氧8h+复氧24 h;3组:缺氧8 h+2 min×3次缺氧后处理;4组:缺氧8 h+5 min×3次缺氧后处理;5组:缺氧8 h+10 min×3次缺氧后处理;6组:缺氧8 h+20 min×3次缺氧后处理.各组经过8h缺氧箱+缺氧Buffer的缺氧处理和24 h复氧后,检测乳酸脱氢酶(LDH)随缺氧时间含量的变化;Tunel法染色计算各组的细胞凋亡率;用Western Blot的方法检测Bcl-2、Bax和caspase-3以及活化caspase-3的蛋白含量表达.实验数据采用SPSS 18.0进行统计分析,2组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析.结果在连续的缺氧过程中,LDH含量在8 h(1563±83.35)IU/L与0 h(582.85±58.25) IU/L比较,差异有统计学意义(P =0.0001).Western Blot结果:2组Bax/Bcl-2表达含量为0.38±0.02,2组与3组0.23±0.01和4组0.22±0.02比较,差异有统计学意义(P =0.012,P=0.005),2组与5组0.33±0.02和6组0.34±0.01比较,差异无统计学意义(P＞0.05).2组活化的caspase-3/caspase-

作者：鲁昆；褚小玲；王绿娅；林煌

来源：中华整形外科杂志 2015 年 31卷 5期