目的:探讨
TCOF1 mRNA表达下降对人胚胎干细胞系H9来源神经嵴细胞(H9-NCC)凋亡的影响，并阐明对
TCOF1表达发挥转录后调控作用的微RNA(miRNA)以及致畸因子视黄酸(RA)调控
TCOF1表达的作用和机制。
方法:将人胚胎干细胞系H9诱导为H9-NCC，通过免疫荧光染色、流式细胞分析检测神经嵴细胞(NCCs)表面标志物P75、HNK-1、AP2，通过实时定量PCR(RT-qPCR)检测NCCs标志物基因
SOX9、
ZIC1、
AP2、
P75、
PAX3和
SOX10表达情况。采用针对
TCOF1基因的慢病毒RNA干扰载体(sh-
TCOF1)在H9-NCC中敲减
TCOF1，并设阴性对照组(sh-Scramble), 观察细胞凋亡状况。通过生物信息学分析，预测可能与
TCOF1 mRNA结合的miRNA为miR-654-5p，利用该miRNA的模拟物，并设阴性对照，采用RT-qPCR方法观察对
TCOF1 mRNA水平的影响。用0.1 μmol/L终浓度的RA处理H9-NCC，观察对
TCOF1 mRNA表达的影响。预测
TCOF1上游转录因子(
HOXA3)并通过RNA干扰技术敲减该转录因子，采用RT-qPCR方法检测
TCOF1 mRNA表达水平，探讨RA调控
TCOF1 mRNA表达的机制。
结果:(1)H9-NCC细胞系诱导成功，免疫荧光染色、流式细
作者：韩蓉；傅歆；肖苒
来源：中华整形外科杂志 2022 年 38卷 6期
