目的 观察TNF-α对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASF)自噬和增殖的影响,并进一步通过抑制NF-κB通路来探讨这一影响的作用机制.方法 以RASF细胞株MH7A为研究对象,在一阶段实验中,根据5 ng/ml TNF-α处理的时间点不同,将细胞分为6组,即0、3、6、12、24及48 h组.在二阶段实验中,将细胞分为4组,即Bay组:细胞用5μg/ml Bay11-7082处理;TNF-α组:细胞用5 ng/ml TNF-α刺激;Bay+TNF-α组:细胞用5μg/ml Bay11-7082预处理2 h,再用5 ng/ml TNF-α刺激;正常对照(Ctrl)组:细胞不作处理.MTT法检测细胞相对活性;共聚焦显微镜下采用GFP-LC3来示踪自噬形成;Western blot法检测细胞内P-p65、自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3-I(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)以及唯Bcl-2同源-3域蛋白-1(Beclin-1)蛋白表达水平;Real time-PCR法检测细胞内Beclin-1 mRNA表达水平;细胞免疫荧光法检测P-p65在细胞中表达及定位.结果 与0 h组相比,12、24、48 h组细胞相对活性均明显升高(均P<0.05).GFP-LC3-Ⅱ腺病毒转染细胞后,与0 h组相比,TNF-α刺激滑膜细胞后自噬小体形成明显增多,其中24 h组最为明显.与0 h组相比,3、6、12 h组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达水平均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05),6、12、24、48 h组Becli

作者：汪吉烽；王维维；吴颖慧；罗晨栩；窦瑞玲；高玲；王国芬；莫选荣；罗心静

来源：浙江医学 2021 年 43卷 16期