目的:本研究通过建立高效干扰同源盒A10(homeobox A10,HOXA10)基因表达的短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,探讨RNA干扰技术逆转人慢性髓系白血病K562细胞株多药耐药的新方案.方法:构建靶向HOXA10基因的真核表达载体pGPHI/GFP/Neo-HOXA10,应用阳离子脂质体将其转染入K562细胞,G418筛选4周.RT-PCR鉴定重组载体稳定转染的细胞株.MTT法检测细胞在转染前后对长春新碱(leurocristine,VCR)、足叶乙苷(etoposide,VP-16)的敏感性变化.FCM法检测各组细胞的凋亡率.结果:经G418筛选后,反转录PCR(reverse transcriptase PCR,RT-PCR)证实成功建立了pGPHI/GFP/Neo-HOXA10 稳定转染的细胞克隆.MTT结果显示,基因干扰组细胞的半数抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC50)值明显低于对照组(P＜0.05),对VCR及VP-16的敏感性明显增强.FCM检测结果表明,基因干扰组细胞联合化疗药物后细胞凋亡率显著增加(P＜0.05).而转染阴性对照组的IC50值及细胞凋亡率与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:以HOXA10基因为靶标构建的shRNA表达载体能明显增强VCR和VP-16对K562细胞的抑制增殖、诱导凋亡作用,提高白血病细胞对化疗药物的敏感性.提示HOXA10基因表达被RNA干扰可以在一定程度上逆转白血病细胞的多药

作者：贾秀红；范文文；李建厂；谢书阳；李有杰

来源：肿瘤 2011 年 31卷 10期