目的 构建DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)的一种异构体3B7的真核质粒表达载体,在体外评价其对人胚肾细胞株293A增殖影响.方法 据GenBank中人DNMT3B7 cDNA序列设计并合成特异性引物,以DNMT3B1为模板,利用高保真Taq酶,进行PCR技术扩增DNMT3B7,并将扩增产物克隆到真核表达载体pCMV-2B中.将携带DNMT3B7基因的质粒pCMV-DNMT3B7及空质粒pCMV-2B转染293A细胞,通过G418筛选出稳定表达的细胞系,MTT法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞的细胞周期分布.同时检测p21蛋白表达情况.结果 成功构建DNMT3B7的真核表达载体并筛选出稳定表达株,与转染空质粒组相比,稳定过表达DNMT3B7组293A细胞株增殖减慢(P＜ 0.0l);过表达DNMT3B7的293A细胞S期细胞比例显著增多(P＜0.05).p21 mRNA和蛋白表达增加(P＜0.05).结论 DNMT3B7基因过表达可抑制293A细胞增殖,p21可能参与了这一过程的调节.
作者：张姝；张伟；姜树原；张颜波；吴松泉；黄丽华；孟宪梅；吉训明；邵国
来源：肿瘤防治研究 2013 年 40卷 12期
