[目的]构建稳定表达ePNP(E.coli PNP)的细胞模型,为肿瘤的基因治疗提供实验基础.[方法]提取大肠杆菌E.coli K12总DNA,PCR方法克隆大肠杆菌ePNP基因,构建逆转录病毒载体质粒pMSCV-ANGPTL4,鉴定测序.脂质体法将三种逆转录病毒载体pMSCV-ANGPTL4、pVSV、pGAG-POL共转染293-EBNA包装细胞,获得高滴度病毒并感染MDA-MB435细胞.荧光显微镜与RT-PCR检测MDA-MB435细胞ePNP基因的表达.[结果]所克隆的ePNP基因与文献报道一致;成功构建了pMSCV/ePNP重组逆转录病毒载体;ePNP基因在MDA-MB435细胞中获得稳定表达.[结论]pMSCV/ePNP自杀基因载体的成功构建及其表达为ePNP应用于肿瘤基因治疗奠定了基础.
作者：李克强；李文林；饶泽昌；赵林；刘东海；唐洪林；石小玉
来源：肿瘤学杂志 2009 年 15卷 4期
