[目的]探讨EZH1/2抑制剂UNC1999对肝癌细胞SMMC-7721的影响及其作用机制.[方法]实验设2个组:DMSO(对照组)、UNC1999组,分别加入不同浓度的DMSO、UNC1999并作用不同时间,用CCK-8法检测细胞OD值,筛选药物较佳的作用浓度及时间;EdU细胞增殖实验及克隆形成实验分别检测细胞增殖和克隆形成能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell侵袭、迁移实验检测细胞侵袭及迁移的能力;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;流式细胞术检测的细胞周期.RNA-seq检测UNC1999对细胞转录组的影响;qRT-PCR法检测药物作用相关基因(EZH1、EZH2)以及转录水平显著差异基因(NECTIN4)的相对表达量;Western Blot法检测EZH1、EZH2、H3K27me3表达情况.[结果]与对照组相比,UNC1999组的肝癌细胞增殖、迁移、侵袭能力均降低(P<0.05);细胞周期发生G0/1阻滞(P<0.05);细胞凋亡数量无明显改变(P>0.05).UNC1999可促进包括多个基因转录水平的改变,首位显著上调的基因为NECTIN4(ENSG00000143217).在基因的转录表达水平上,UNC1999组的EZH1、EZH2无明显降低(P>0.05);而在蛋白表达水平上,两者表达降低(P<0.05),同时H3K27me3也表达下降(P<0.05).[结论]UNC1999能通过在蛋白水平上抑制表观遗传子EZH1、EZH2的表达及其催化组蛋白甲基化的功能,发挥抑制肝癌
作者:唐秀鑫;邓小红;辛晓萍;李劼;何晓顺;黄俊琪
来源:中山大学学报(医学科学版) 2019 年 40卷 6期