目的 观察粉防己碱对黑色素瘤细胞B16 增殖、迁移、侵袭的影响,并探讨其对上皮间质转化(EMT)的作用及潜在调控机制.方法 (1)以 0、2、4、6、8、10 μmol·L-1粉防己碱干预B16 细胞 24、48 h后,采用CCK-8 法检测细胞增殖情况.1、2、4 μmol·L-1 粉防己碱干预后,通过平板克隆形成实验检测B16 细胞集落形成能力;通过细胞划痕实验及Transwell小室侵袭实验检测B16 细胞的迁移、侵袭能力;采用Western Blot法检测B16 细胞EMT相关的N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达情况.通过尾静脉注射B16 细胞复制小鼠黑色素瘤肺转移模型,观察粉防己碱(50、100 mg·kg-1)灌胃给药对小鼠肺部转移肿瘤结节数的影响.(2)利用CTD、SwissTargetPrediction和Similarity Ensemble Approach数据库预测粉防己碱的作用靶点;通过GeneCards数据库检索黑色素瘤疾病相关靶点;取二者的交集靶点,即为粉防己碱治疗黑色素瘤的潜在作用靶点.将交集靶点导入STRING数据库,构建蛋白互作(PPI)网络,筛选核心靶点;将交集靶点导入DAVID数据库进行GO功能及KEGG通路富集分析.利用AutoDock软件对粉防己碱与核心靶点进行分子对接验证.(3)体外实验验证:1、2、4 μmol·L-1 粉防己碱干预后,采用Western Blot法检测关键通
作者:梁娇;茆文莉;张力升;侯聪艳;陈思柔;张韧;何彦丽
来源:中药新药与临床药理 2023 年 34卷 12期