目的 构建pG-miR-7-Sponge转基因小鼠的真核载体并检测其表达活性,为转基因小鼠的建立提供前期实验基础.方法 利用miRNA sponge(海绵体)技术原理,合成miR-7-Sponge序列,酶切连接入真核表达载体eGFP-C2并转化Stbl3感受态细胞,克隆PCR、酶切和测序鉴定重组载体eGFP-C2-miR-7-Sponge(简称pG-miR-7-Sp);将重组载体pG-miR-7-Sp体外瞬时转染人肺癌95D细胞,荧光显微镜下观察细胞的GFP表达情况;Real-Time PCR检测细胞中miRNA-7的表达;MTT法检测细胞的增殖变化.结果 经克隆PCR、酶切鉴定及测序分析,成功构建了真核表达载体pG-miR-7-Sp;pG-miR-7-Sp瞬时转染95D细胞48 h后,与对照组细胞相比,miR-7表达水平明显降低(P＜0.05);同时细胞的生长明显加快(P＜0.05).结论 成功构建pG-miR-7-Sp真核表达载体.
作者：李永菊；周涯；陈超；朱顺飞；胡燕；秦娜琳；郑静；徐林
来源：遵义医学院学报 2014 年 37卷 2期
