目的:建立人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-B2704基因型强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者来源的人诱导多能干细胞(human-induced pluripotent stem cells,hiPSCs)体系.方法:采用逆转录病毒介导的感染系统把OCT4、SOX2、c-MYC、KLF4这4个外源转录因子导入HLA-B2704基因型AS患者的尿液细胞中,重编程获得hiPSCs.通过形态观察、碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色、内源多能性相关基因检测、体外拟胚体(embryoid bodies,EBs)分化检测、EBs三胚层基因检测以及畸胎瘤形成实验,鉴定获得的hiPSCs.结果:病毒感染尿液细胞后第4天至第5天细胞核质比增大,第14天左右出现克隆,第24天后形成与人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)相似的克隆.碱性磷酸酶染色显示,hiPSCs和hESCs-H1一样,均被染成紫红色,呈阳性.免疫荧光染色显示,hESCs阶段特异性胚胎抗原4及ESCs转录因子OCT4、SOX2均呈阳性.hiPSCs内源多能性基因OCT4、SOX2、NANOG和REX1的表达与H1内源多能性相关基因的表达比较,差异均无统计学意义(1.006±0.208,1.000±0.340,t =0.038,P=0.972;1.061±0.140,1.000±0.387,t =0.431,P =0.689;1.386±0.354,1.000±0.032,t=1.467,P=0.303;1.280±0.283,1.000±0.013,t=1.398,P=0.235).EBs

作者：黄小龙；全仁夫；胡华辉；李伟；李强；邱锐；孙亚萍；杨迪生

来源：中医正骨 2017 年 29卷 12期