目的：观察结核分枝杆菌早期分泌靶抗原（ESAT-6）对γδT细胞产生淋巴因子的影响，并对其信号转导机制进行初步探讨。方法使用 Ficoll密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞（PBMC），用流式细胞术分选纯化γδT细胞；Toll样受体-4（TLR-4）特异性抑制剂 E5564处理γδT细胞以抑制 TLR-4的功能，并用蛋白质免疫印迹法（Western blot）及逆转录-PCR （RT-PCR）法检测γδT细胞TLR-4蛋白及mRNA的表达，以不加任何刺激因子的γδT细胞作空白对照，用（ESAT-6）刺激γδT细胞，并在第0、1、3、6、9和12 d取细胞上清液，用酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒检测 IL-17、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及干扰素-γ（IFN-γ）的分泌水平。结果 Western blot及PCR结果显示 ESAT-6能显著提高γδT细胞TLR-4基因的转录与蛋白的表达（P＜0．01）；ESAT-6能显著提高γδT细胞 IL-17、TNF-α、IFN-γ的表达（P＜0．01），而TLR-4特异性抑制剂 E5564能显著的抑制ESAT-6所致的γδT细胞 IL-17、TNF-α、IFN-γ淋巴因子的增加（P＜0．01）。结论 ESAT-6能显著上调γδT细胞 IL-17、TNF-α及 IFN-γ的表达，其增强γδT细胞 IL-17、TNF-α及 IFN-γ表达的信号转导机制可能与TLR-4信号通路有关。
作者：代光明；汪洪；郑权；杜先智
来源：重庆医学 2014 年 13期
