目的 对传统的三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法进行改良,探索一种较好的高脂血浆的高丰度蛋白去除方法.方法 分别用不同体积(1、3、4、5、6、8、10和20倍样品体积)、不同TCA浓度(10％、30％、40％、50％、60％、70％)的TCA/丙酮溶液处理高脂血浆处理所得上清和沉淀蛋白样品分别进行一维十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证比较,确定去除效果最佳的TCA/丙酮溶液,用该浓度TCA/丙酮溶液与含有10％三氯乙酸的TCA/丙酮溶液同时处理血浆,对所得沉淀蛋白进行二维SDS-PAGE验证,并对所得上清和沉淀蛋白质进行Nano HPLC-Chip-MS/MS鉴定比较.结果 4倍样品体积的TCA/丙酮溶液去除高丰度蛋白的效果较好,增加或减少TCA/丙酮溶液的体积都会影响去除效率；60％ TCA/丙酮溶液去除血浆中高丰度蛋白质的效率比10％、20％、30％、50％ TCA/丙酮好,而70％ TCA/丙酮溶液处理血浆的重复性较差.质谱鉴定结果显示,4倍样品体积的60％ TCA/丙酮溶液与10％ TCA/丙酮溶液处理后的血浆样品相比,可鉴定更多的低丰度蛋白质.结论 用4倍样品体积的60％ TCA/丙酮溶液去除血浆中高丰度蛋白质的效果最为理想,尤其适用于较高脂含量的样品的处理.
作者：王俊；冯里茹；于微；徐健；杨慧；刘小立
来源：卫生研究 2013 年 42卷 5期
