目的 探讨沉默YB-1基因对肝癌细胞化学治疗敏感性的影响及可能机制.方法 根据YB-1靶点序列设计YB-1基因siRNA干扰序列,与EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后的线性化pLKD-CMV-G&PR-U6慢病毒载体连接及转化形成重组慢病毒;参照此方法设计并构建阴性对照重组慢病毒,并将其转染肝癌细胞SMMC-7721,分别命名为YB-1-siRNA组和NC-siRNA组,设置空白对照组(未经任何处理的肝癌细胞SMMC-7721),分别加入含顺铂(1μg/ml)和多柔比星(1μg/ml)的现配培养基.采用实时荧光定量PCR检测各组药物处理前后YB-1 mRNA表达水平;采用MTT法检测药物处理前后各组细胞的增殖情况;采用流式细胞术检测药物处理前后各组细胞的凋亡情况,采用Western blot检测各组药物处理后PI3K、AKT和GSK-3β蛋白的表达.结果 处理前后,YB-1-siRNA组、NC-siRNA组和空白对照组间YB-1 mRNA表达水平及细胞活力差异均有统计学意义(P<0.05),与处理前比较,处理后YB-1-siRNA组、NC-siRNA组和空白对照组YB-1 mRNA表达水平和细胞活力均显著下降(P<0.05).处理前后,YB-1-siRNA组、NC-siRNA组和空白对照组间细胞凋亡率的差异有统计学意义(P<0.05);与处理前比较,处理后各组细胞凋亡率均显著升高(P<0.05).经药物处理后,3组间PI3K、AKT和GSK-3β蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05).

作者：方云；刘波；芦东徽；陈慧慧；朱捷

来源：中国肝脏病杂志（电子版） 2019 年 11卷 2期