目的 探讨神经干细胞(neural stem cells,NSCs)提取、培养的最佳方法,为NSCs的基础研究提供技术参考.方法对NSCs的不同提取、培养方法进行比较:提取胎鼠与乳鼠的大脑皮质、采用不同类型培养基、不同接种密度、不同培养方法、不同换液方法、不同传代方法,观察NSCs的成球率和NSCs未分化状态的稳定性.用多功能微孔板读数仪检测NSCs活性.结果 ① 胎龄14 d胎鼠较新生24 h内乳鼠的大脑皮质提取NSCs的比例高,杂细胞少,形成的神经球数量多.② 采用无血清培养基,NSCs可以稳定在未分化状态;而采用含血清培养基,NSCs多数分化为神经元和胶质细胞.③ 以1.0×109·L-1密度接种的NSCs,培养形成的神经球数量多,且状态良好.④ 悬浮培养法较贴壁培养法,可以形成稳定的神经球,有利于保持NSCs处于未分化的状态.⑤半量换液法和只加液不弃液法培养形成的神经球的状态优于全量换液法.⑥ 原代和1代的神经球用机械吹打法传代后,NSCs的活细胞比例高,再次形成的神经球状态好,且较其他两种方法简便;2代及以后的神经球用Accutase酶传代后,NSCs的活细胞比例高,再次形成的神经球状态好.⑦14 d胎鼠Accutase酶消化组的NSCs活性高于另外3组,差异均具有显著性(P<0.05).结论 提取胎龄14 d胎鼠的大脑皮质,采用无血清培养基,以1.0×109·L-1的密
作者：吴增；李媛；靳晓飞；周晓红；高维娟
来源：中国药理学通报 2018 年 34卷 5期
