目的 构建白介素-6(IL-6)过表达慢病毒稳转细胞系,探讨其对乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝病毒DNA(HBV-DNA)表达的影响.方法 以Huh7细胞gDNA为模板,通过PCR技术扩增获得IL-6片段并克隆到pMIGR1载体上,测序鉴定正确后,分别用pMIGR1质粒和pMIGR1-IL-6质粒与慢病毒包装质粒pCL-10A1共转染293T细胞,获得重组慢病毒颗粒,分别感染Huh7细胞,嘌呤霉素筛选出成功表达目的质粒的阳性细胞,分别命名为Huh7/con和Huh7/IL-6,电化学发光法检测细胞培养上清液中IL-6表达水平;qRT-PCR技术检测细胞中IL-6 mRNA表达水平;化学发光微粒子免疫检测法检测HBsAg、HBeAg表达水平,PCR-荧光探针法检测HBV-DNA表达水平.结果 通过测序验证成功构建pMIGR1-IL-6质粒;通过慢病毒介导成功筛选出Huh7/con和Huh7/IL-6细胞系;电化学发光法及qRT-PCR结果显示,与对照组Huh7/con细胞系比较,Huh7/IL-6细胞系培养上清液IL-6水平及细胞中IL-6 mR-NA水平显著升高;pcDNA1.3质粒转染Huh7、HepG2、Huh7/IL-6细胞6、12、24、48 h后上清液中IL-6表达水平显著升高;20 ng/ml IL-6处理pcDNA1.3质粒转染后的Huh7和HepG2细胞6、12、24、48 h后上清液中HBsAg、HBeAg、HBV-DNA表达水平显著下降;pcDNA1.3质粒转染Huh7/IL-6细胞6、12、24、48 h后上清

作者：潘正兰；管世鹤；陈礼文；杨凯；张浩；段元丽；王兆飞；王秀；侯舒文

来源：安徽医科大学学报 2019 年 54卷 4期