目的 探究靶向表皮生长因子受体(EGFR)的抗体西妥昔单抗(Cetuximab)与MHC-I(major histocompatibility complex-I)相关抗原分子MICB (MHC class I-related chain molecules B)的融合蛋白对肝癌细胞Huh7的杀伤效果.方法 通过重叠PCR(polymerase chain reaction)的方法通过柔性肽G4S将西妥昔单抗重链C末端及人MICB胞外区基因连接,构建成工程载体,并通过毕赤酵母进行表达;流式检测融合蛋白对Huh7细胞的结合能力;噻唑蓝(MTT)法检测Huh7细胞的增殖抑制;通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)实验验证融合蛋白是否能激活NK细胞杀伤肿瘤细胞.结果 通过基因工程手段和毕赤酵母表达,成功获得融合抗体蛋白,经Western blot鉴定结果说明融合蛋白Cetuximab-MICB表达及装配正确.流式细胞术检测Cetuximab-MICB与肝癌细胞Huh7的结合率为72.8％,与母体西妥昔单抗结合率(75.5％)相当.细胞增殖抑制实验,与PBS组对照相比,西妥昔单抗、融合蛋白组对肝癌细胞Huh7均有抑制作用,且抑制作用呈浓度依赖性.在蛋白浓度为400 nmoL/L时,Cetuximab-MICB融合蛋白组抑制率(66.09％)强于西妥昔单抗组(56.54％).将免疫细胞PBMC(peripheral blood mononuclear cell)/NK92和肿瘤细胞Huh7共孵育,通过检测LDH(lactate dehydrogenase)的释放,

作者：杜志娜；曲韬；尉迟敏

来源：标记免疫分析与临床 2017 年 24卷 1期