目的：为研究 HSG 基因不同表达程度对肺癌细胞的影响，构建并鉴定 HSG 基因 RNA 干扰慢病毒表达载体，以建立 HSG 基因沉默的人肺癌细胞株。方法针对 HSG mRNA 设计了4条 siRNA，并构建 pGCSIL-GFP-HSG 慢病毒质粒，通过测序鉴定。采用构建的 pGCSIL-GFP-HSG，pHelper1.0和pHelper2.0共感染293T 细胞，包装产生慢病毒，测定其滴度。将慢病毒转染人肺腺癌细胞株 A549，通过 real-time PCR 分析 HSG 基因表达。结果测序结果显示，DNA 序列与实验要求序列一致，提示插入人HSG 基因 RNAi 序列正确。荧光显微镜观察转染慢病毒包装质粒后的细胞，见细胞生长良好，荧光强度强烈。测定病毒滴度为3×108 TU / ml。real-time PCR 分析提示 RNA 干扰病毒感染 A549细胞株后，HSG基因表达显著下调。结论人 HSG 基因 RNAi 慢病毒载体构建成功，可用于肿瘤学的进一步应用。
作者：楼煜清；李榕；刘洁琳；张岩巍；刘雅；王佐广；温绍君；韩宝惠
来源：北京生物医学工程 2015 年 4期
