目的：通过观察益心解毒方含药血清对Nox2、Nox4亚基过表达的H9 c2心肌细胞NADPH氧化酶活性的影响，揭示其作用环节是否与干预相应亚型的 NADPH 氧化酶调控环节有关。方法采用PCR方法扩增Nox2、Nox4基因全长序列，经双酶切、连接载体和转化后提取重组质粒，经酶切鉴定的阳性质粒进行DNA测序，测序正确后按照lipofectamine 2000试剂的说明书瞬时转染H9 c2细胞，转染后的心肌细胞分组给予不同的药物干预，24 h 后检测 NADPH 氧化酶活性。结果①含有Nox2／Nox4亚基的重组质粒载体通过测序鉴定，结果与GenBank报道的完全一致。②通过荧光显微镜下观察转染72 h后的H9 c2细胞，可见大量发绿色荧光的细胞，流式细胞术计数结果显示转染率均在60％左右，符合实验要求。③空质粒载体组、模型组、益心解毒方组的NAD－PH氧化酶活性表达明显高于正常组（ P＜0．01，P＜0．05）；模型组和益心解毒方组的NADPH氧化酶活性表达高于空载体组（ P＜0．01）；模型组NADPH氧化酶活性表达均明显高于其他各组，而益心解毒方各组的NADPH氧化酶活性表达均明显低于模型组（ P＜0．01， P＜0．05）。结论成功构建大鼠心肌细胞Nox2、Nox4亚基的重组质粒载体，该重组质粒载体可以在心肌细胞中过表达，益心解毒方可以有效地降低NADPH氧
作者：解华；麻春杰；郭淑贞；张前；付帮泽；高阔；王伟
来源：现代中医临床 2015 年 2期
