目的：构建细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）糖基化位点突变质粒，探讨其与肿瘤细胞增殖的关系。方法：利用PCR定点诱变技术构建 EMMPRIN糖基化位点突变质粒。突变成功后，对突变质粒进行功能检测，Western blotting 法检测 EMMPRIN蛋白表达；免疫荧光法检测细胞形态学变化；MTT法检测突变质粒与肿瘤细胞增殖的关系。结果：酶切鉴定和测序证实，将 EMMPRIN序列中第44、152和186位的天冬酰胺突变成谷氨酰胺，成功构建 EMMPRIN／GFP（N44Q）、EMMPRIN／GFP（N152Q）和 EMMPRIN／GFP（N186Q）糖基化单点突变质粒；糖基化位点突变后，突变型细胞核分裂相显著减少，伪足数减少；MTT法检测，与对照组比较，野生型组细胞存活率明显升高（P＜0.05）；而 EMMPRIN 糖基化位点突变后，与野生型比较， EMMPRIN（N44Q）、EMMPRIN （N152Q）和 EMMPRIN （N186Q）细胞存活率均明显降低（P ＜0.05）。结论：EMMPRIN突变型能抑制肿瘤细胞的增殖，且随作用时间增加，抑制作用减弱；EMMPRIN糖基化修饰与肿瘤细胞的增殖有关联。
作者：赵超悦；宋润敏；秦晖；王娜；杨柳；李江
来源：吉林大学学报（医学版） 2014 年 3期
