目的：探讨利用治疗剂量脉冲电场产生不可逆电穿孔（IRE）介导 HPV16 E6 shRNA 干扰质粒进入细胞的可行性，阐明二者共同作用对宫颈癌 SiHa 细胞增殖的影响及其作用机制。方法：将 HPV16 E6基因特异性干扰序列插入 pGenesil-1质粒，构建 HPV16 E6 shRNA 真核表达载体，将10个电压为800 V、脉宽100μs、频率1 Hz 的 IRE 作用于 SiHa 细胞与 HPV 16 E6 shRNA 干扰质粒的混悬液，根据处理因素组合，分为空白对照组、IRE 处理组、pGenesil-N 组、pGenesil-N＋IRE 组、pGenesil-E6组和 pGenesil-E6＋IRE 组。在荧光显微镜下观察 SiHa 细胞绿色荧光蛋白（GFP）的表达，计算 GFP 表达效率；RT-PCR 法检测 HPV 16 E6 mRNA 表达水平，Western blotting 法检测 HPV16 E6蛋白、P53及 PCNA 蛋白表达水平，CCK-8法检测各组 SiHa 细胞增殖能力的变化。结果：成功构建 HPV16 E6 shRNA 真核表达载体，IRE 处理后24 h 细胞即可见到绿色荧光；与IRE 组比较，pGenesil-E6＋IRE 组 E6 mRNA 表达水平下降（P ＜0.05），E6蛋白表达水平降低（P ＜0.05）， P53蛋白表达水平增高（P ＜0.05），PCNA 表达水平下降（P ＜0.05）；CCK-8法检测，与 pGenesil-E6组比较， pGenesil-E6＋IRE 组细胞增殖活性下降更明显（P ＜0.05）。结论

作者：王智亮；余腾骅；秦琴；吴雨桐；张文倩；华媛媛；熊正爱；周玮

来源：吉林大学学报（医学版） 2015 年 6期