目的:构建小鼠Hsp84基因真核表达质粒.方法:采用逆转录、热降落PCR方法,扩增BALb/c小鼠Hsp84基因片段,将其连入pMD18-T载体,筛选阳性克隆、测序验证.然后以重组T载体为模板,PCR扩增目的序列,插入真核表达质粒pcD-NA3.1中,转化大肠杆菌DH5 α,通过琼脂糖电泳、双酶切挑选和验证阳性重组克隆.结果:RT-PCR自小鼠脑组织中扩增出目的基因片段,克隆入pMD18-T载体后,测序结果证明为BALb/c小鼠Hsp84基因.插入目的基因的真核表达载体的酶切谱与设计一致.结论:成功构建了小鼠Hsp84编码框全长的真核细胞表达质粒.
作者：季业伟；赵艳；王华；徐晓玉；周元国
来源：重庆医科大学学报 2006 年 31卷 6期
