目的:构建Hsp90α(Heat shock protein 90 alpha)siRNA(Small interfencing RNA)表达载体,为后续的功能研究提供平台.方法:根据Hsp90α基因cDNA序列,设计有小发夹结构的3条寡核苷酸序列到空载体Psuper EGFPI中,转化TOP10菌株,提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析.将三条序列和对照序列的质粒分别转染HUK293细胞,提取总RNA,用RT-PCR检测Hsp90 α mRNA的量.结果:经酶切鉴定、电泳证明,含作用序列的重组质粒pSuper-Hsp90 α1,pSuper-Hsp90 α2,及pSuper-Hsp90α3构建是成功的,重组质粒pSuper-Hsp90α 1,pSuper-Hsp90α2测序分析完全正确.用RT-PCR初步证明三条均有干扰效果,pSuper-Hsp90α1最明显.结论:用于Hsp90α RNAi的重组质粒可于体外成功构建,初步确定pSuper-Hsp90α1为最佳作用靶点.
作者：聂滨；曾照芳
来源：重庆医科大学学报 2007 年 32卷 6期
