目的构建人CTLA-4胞外区蛋白毕赤酵母分泌型表达载体, 获得高拷贝稳定整合菌株,为大量获得人CTLA-4胞外区蛋白,进行功能研究及其临床应用奠定基础.方法从活化人外周血淋巴细胞总RNA中,扩增人CTLA-4基因胞外区cDNA片段,将目的基因插入酵母表达载体pPIC9 α分泌信号下游,再插入高拷贝载体pP IC9K,得到pPIC9K-CTLA4,SaLⅠ线性化后电转GS115;G418梯度筛选转化菌.PCR、Southe rn blotting鉴定目的基因整合及拷贝数.结果成功构建了人CTLA-4胞外区cDNA毕赤酵母表达载体,获得了高拷贝稳定整合菌株.结论为表达人CT LA-4胞外区蛋白及其功能研究和临床应用奠定了基础.
作者：易绍萱；吴军；贺伟峰；罗高兴；陈希炜；朱谨；代飞
来源：重庆医学 2002 年 31卷 8期
