目的构建重组大鼠γ-干扰素真核表达载体,探讨其转染大鼠肺泡巨噬细胞(AM)和气道上皮细胞的可行性及表达水平.方法采用RT-PCR技术克隆了大鼠γ-干扰素,并将其定向克隆到逆转录病毒载体pLXSN上,构成真核表达重组载体.将重组载体转染培养的AM和气道上皮细胞.用PCR法鉴定重组载体整合在细胞基因组DNA中.并检测细胞培养上清中γ-干扰素浓度和活性.结果 DNA测序证明,构建的重组载体中γ-干扰素的基因方向正确,DNA序列与GeneBank中大鼠的γ-干扰素cDNA序列相同.转染后AM和气道上皮细胞基因组DNA的PCR产物电泳可见转染的重组载体DNA片段条带.pLXSN-IFN载体组的AM和气道上皮细胞培养上清中大鼠γ-干扰素浓度和活性显著高于pLXSN空载体组(P<0.01).结论本研究构建的大鼠γ-干扰素重组表达载体可成功地转染大鼠AM和气道上皮细胞,整合入基因组DNA,并分泌有活性的γ-干扰素,为进一步的体内基因转染研究奠定基础.
作者：黄桂君；农江；马壮；钱桂生；李淑萍；陈维中
来源：第三军医大学学报 2002 年 24卷 1期
