目的采用RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术,通过构建人糖皮质激素受体α(glucocorticoid receptor α, GRα)基因的特异性siRNA(small interfere RNA)真核表达载体,体外观察对GRα基因的沉默作用及生物学效应. 方法采用基因克隆技术,将合成的发卡样特异性GRα干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体(pPUR/U6),构建GRα siRNA的表达载体,转染体外ECV-304细胞,48 h后观测胞内GRα蛋白水平(Western blot)及对LPS刺激后细胞因子产生的影响作用.结果①成功构建发卡样GRα siRNA真核表达载体(pPUR/U6- GRα siRNA);②pPUR/U6- GRα siRNA转染(脂质体法)ECV-304细胞,48 h后明显下调胞内GRα蛋白水平;③转染pPUR/U6-GRα siRNA的细胞,在LPS刺激后,其TNF-α、IL-1β的表达释放显著高于空载体对照组.结论该RNA干扰真核表达载体能明显干扰GRα蛋白的表达、释放,结果促进了LPS刺激后炎性细胞因子的表达释放.进一步说明严重创伤所引起的糖皮质激素受体下调是机体应激紊乱的重要原因.
作者：王明海；粟永萍；程天民；王锋超；陆建华；刘晓宏；李洪涛
来源：第三军医大学学报 2004 年 26卷 20期
