目的 研究模拟微重力条件下小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESc)拟胚体(embryoid bodies,EBs)的形成及分化.方法 胰酶消化普通培养的小鼠胚胎干细胞,调整细胞数为1×106·ml-1,移入可模拟微重力的旋转型生物反应器内进行培养,显微镜动态观察鼠EBs的形成,苏木精-伊红染色观察ESc的组织细胞分化情况,检测培养过程中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的漏出量.取不同时相的EBs,接种6孔培养板培养3～5 d,倒置相差显微镜观察EBs来源细胞的分化.结果 生物反应器旋转培养24 h即可肉眼观察到大量多细胞聚集体形成,相差显微镜和立体显微镜下发现,72 h后细胞聚集体进一步形成均一的EBs.随培养时间延长EBs体积不断增大,并不断有新的EBs出现.HE染色显示,EBs中的ESc呈现多组织多细胞分化特征,培养后期(12 d以后)较大EBs中心有不同程度的坏死,伴LDH漏出量的明显升高.接种EBs于6孔培养板后,镜下观察到不同类型的细胞,如内皮样细胞、成纤维样细胞、肝细胞样细胞、血管样结构以及可自发性搏动的心肌样细胞.结论 ESc在模拟微重力条件下可大量快速形成EBs,伴有不同类型的组织细胞分化.旋转型生物反应器可作为ESc研究的有用工具.
作者：刘卫生；王英杰；刘涛；张世昌
来源：第三军医大学学报 2008 年 30卷 17期
