目的 研究在非接触式共培养体系下,RNA干扰多发性骨髓瘤细胞株U266 APE1表达对与其共培养的THP-1细胞破骨样分化的影响.方法 ①将构建的APE1 siRNA表达载体导入U266细胞中.②Western blot法检测U266细胞中APE1及破骨细胞分化因子(RANKL)蛋白表达.③建立非接触式共培养体系:THP-1+ U266共培养组、THP-1+U266APE1siRNA共培养组和THP-1细胞单培养组.④抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定破骨样细胞,RT-PCR法检测THP-1细胞Cathepsin K和V-ATPase mRNA表达水平.⑤光镜下观察骨切片陷窝形成.结果 APE1 siRNA能明显抑制U266细胞中APE1及RANKL蛋白表达(P＜0.01).THP-1细胞与U266细胞共培养后,THP-1细胞可分化为TRAP阳性的破骨样细胞,Cathepsin K和V-ATPase基因表达显著升高(P＜0.05)；U266细胞经APE1 siRNA处理后,共培养体系中THP-1细胞诱导分化的OCLs数量减少,Cathepsin K和V-ATPase基因水平降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 APE1 siRNA能明显抑制U266细胞诱导的THP-1细胞的破骨样分化,其机制可能与APE1下调U266细胞RANKL有关.
作者：周立为；杜佳；张亮；程燚；王东；谢家印
来源：第三军医大学学报 2013 年 35卷 16期
