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目的 观察G蛋白偶联胆汁酸受体1 (G protein-coupled bile acid receptor 1,TGR5)受体激活后对内皮素-1(endothelin-1,ET-1)诱导心肌细胞肥大的作用及其机制的探讨.方法 原代培养乳鼠心肌细胞,分为空白对照组和ET-1组,ET-1组的浓度分别为10-6、10-7、10-s mmol/L,分别培养12、24、36、48 h,分别检测各组心肌细胞表面积和总蛋白浓度,建立心肌肥大细胞模型.将心肌细胞分为对照组、ET-1组、ET-1 +INT-777(TGR5受体激动剂)组、ET-1+INT-777 +TGR5 siRNA(干扰TGR5表达)组、ET-1+ INT-777+TGR5 siRNA-NC(空病毒)组.采用图像分析系统测定心肌细胞表面积,BCA法测定细胞总蛋白量,RT-PCR检测TGR5、钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)的mRNA,Western blot方法检测心房尿钠因子(atrial natriuretic factor,ANF)、β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)、TGR5、CaN、活化T细胞核因子3 (activated T cell nuclear factor 3,NFAT3)的蛋白表达变化.结果 48h内,ET-1诱导心肌细胞肥大在10-8 mmol/L~10-6 mmol/L浓度范围内成明显浓度依赖性和时间依赖性(P<0.05),其中ET-1 10-6 mmol/L培养48 h心肌细胞表面积为(3 624.7 ±71.60)um2,总蛋白量(51.810±1.47) μg,显著高于对照组表面积(1 560.8±3 188.94)um2和总蛋白

作者:陈德秀;李家富;冯健

来源:第三军医大学学报 2019 年 41卷 10期

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作者:
陈德秀;李家富;冯健
来源:
第三军医大学学报 2019 年 41卷 10期
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G蛋白偶联胆汁酸受体1 内皮素-1 心肌细胞肥大 钙调神经磷酸酶 活化T细胞核因子3
目的 观察G蛋白偶联胆汁酸受体1 (G protein-coupled bile acid receptor 1,TGR5)受体激活后对内皮素-1(endothelin-1,ET-1)诱导心肌细胞肥大的作用及其机制的探讨.方法 原代培养乳鼠心肌细胞,分为空白对照组和ET-1组,ET-1组的浓度分别为10-6、10-7、10-s mmol/L,分别培养12、24、36、48 h,分别检测各组心肌细胞表面积和总蛋白浓度,建立心肌肥大细胞模型.将心肌细胞分为对照组、ET-1组、ET-1 +INT-777(TGR5受体激动剂)组、ET-1+INT-777 +TGR5 siRNA(干扰TGR5表达)组、ET-1+ INT-777+TGR5 siRNA-NC(空病毒)组.采用图像分析系统测定心肌细胞表面积,BCA法测定细胞总蛋白量,RT-PCR检测TGR5、钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)的mRNA,Western blot方法检测心房尿钠因子(atrial natriuretic factor,ANF)、β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)、TGR5、CaN、活化T细胞核因子3 (activated T cell nuclear factor 3,NFAT3)的蛋白表达变化.结果 48h内,ET-1诱导心肌细胞肥大在10-8 mmol/L~10-6 mmol/L浓度范围内成明显浓度依赖性和时间依赖性(P<0.05),其中ET-1 10-6 mmol/L培养48 h心肌细胞表面积为(3 624.7 ±71.60)um2,总蛋白量(51.810±1.47) μg,显著高于对照组表面积(1 560.8±3 188.94)um2和总蛋白