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目的 利用基因工程方法表达胸腺素α1(thymosinalpha1,Tα1)的串联体并进行纯化、鉴定.方法 将Tα1的基因拆分为4个片段进行合成,退火后经PCR获得串联体基因,测序正确后克隆在硫氧还蛋白(thioredoxin)融合蛋白表达载体pThioHisA中,转化大肠杆菌TOP10菌株,IPTG诱导表达,表达的融合蛋白经过80℃热处理及阴离子交换柱Q-SepharoseFastFlow进行纯化,Western-blot进行鉴定.结果 获得了纯化的Thioredoxin-Tα1③,分子质量约为31ku.结论 用基因串联思路表达小分子多肽是一种可行的方法,Tα1③的成功表达为检测其生物学活性奠定了基础.

作者:薛晓畅;颜真;石继红;韩苇;张英起

来源:第四军医大学学报 2001 年 22卷 3期

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作者:
薛晓畅;颜真;石继红;韩苇;张英起
来源:
第四军医大学学报 2001 年 22卷 3期
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胸腺素α1 串联体 克隆 基因表达 融合蛋白
目的 利用基因工程方法表达胸腺素α1(thymosinalpha1,Tα1)的串联体并进行纯化、鉴定.方法 将Tα1的基因拆分为4个片段进行合成,退火后经PCR获得串联体基因,测序正确后克隆在硫氧还蛋白(thioredoxin)融合蛋白表达载体pThioHisA中,转化大肠杆菌TOP10菌株,IPTG诱导表达,表达的融合蛋白经过80℃热处理及阴离子交换柱Q-SepharoseFastFlow进行纯化,Western-blot进行鉴定.结果 获得了纯化的Thioredoxin-Tα1③,分子质量约为31ku.结论 用基因串联思路表达小分子多肽是一种可行的方法,Tα1③的成功表达为检测其生物学活性奠定了基础.