背景与目的:DNA甲基化调节基因表达,且与肿瘤发生相关,干扰抑癌基因甲基化可能成为防治肿瘤的新途径.细胞内砷代谢和DNA甲基化都需要S-腺苷蛋氨酸作为甲基供体.本文拟探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)诱导因高甲基化失活的抑癌基因p16重新表达的可能性及其机制.方法:以p16基因高甲基化失活的人骨髓瘤细胞系U266为研究对象,经不同浓度As2O3处理后,采用限制性内切酶HpaⅡ及其同裂酶Msp Ⅰ结合PCR技术,检测基因组DNA及p16基因甲基化状态;RT-PCR技术检测p16基因和DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)mRNA表达;Western blot技术检测P16蛋白表达.结果:(1)U266细胞具有p16基因高甲基化并失表达的特点,即基因组DNA经Msp Ⅰ酶切后电泳呈"涂抹"现象,而经HpaⅡ酶切后与未经酶切的DNA一样均呈单一条带;经Msp Ⅰ酶切后的DNA不能经PCR扩增出p16基因产物,而HpaⅡ酶切后的DNA与未经酶切的DNA一样均能扩增出340 bp的p16基因产物;RT-PCR法检测U266细胞无p16 mRNA产物,Westernblot检测也未见P16蛋白带.(2)0.5～2.0 μmol/L As2O3处理后的U266细胞DNA经HpaⅡ酶切后电泳呈"涂抹"现象,也不再能扩增出p16基因产物.1.0 μmol/L和2.0 μmol/LAs2O3处理的U266细胞还扩增出p16基因mRNA产物;Western blot也检测到P16

作者：黎金庆；李渊；石永进；武淑兰

来源：癌症 2004 年 23卷 6期