背景及目的:自杀基因疗法的瓶颈之一是自杀基因在肿瘤细胞的特异性表达水平低.利用肿瘤特异性启动子来调控自杀基因使其在肿瘤细胞中特异性表达已成为肿瘤自杀基因研究的热点.研究证实血管内皮生长因子在绝大多数实体瘤细胞中都有过量表达而在正常组织中不表达或表达甚微,其过量表达与血管内皮生长因子启动子( vascular endothelial growth factor promoter,VEGFP)活性上调有关.为研究 VEGFP可否提高 TK自杀基因在肿瘤细胞的特异性表达水平,本研究应用一种高效的重组腺病毒构建系统,即 AdEasier 1系统制备含 VEGFP驱动 TK自杀基因的重组腺病毒.方法: VEGFP自 pEGFP 1 SV VEGFP切下后插入 pAdtrack载体上构建 pAdtrack VEGFP.用 Hind Ⅲ /XbaⅠ自 pREP8 TK切出带 polyA加尾信号的 TK基因,亚克隆到 pAdtrack VEGFP中构建转移质粒 pAdtrack VEGFP TK. PmeⅠ酶线性化转移质粒 pAdtrack VEGFP TK,转化含腺病毒基因组质粒 pAdEasy 1的细菌 AdEasier 1,用 25 μ g/ml卡那霉素筛选阳性克隆,先后进行琼脂糖电泳和 PacⅠ酶切鉴定,筛选出正确重组腺病毒质粒 pAdEasy VEGFP TK,经 293细胞包装、扩增获得重组腺病毒 Ad VEGFP TK,行酶切鉴定、 PCR鉴定和测序.结果:卡那霉素抗性细菌只有两种,一种含 pAdEasy VEGFP TK(大

作者：陈建发；黄宗海；黄元媛；宋慧娟；车小燕

来源：癌症 2004 年 23卷 9期