目的构建晚期糖化终产物受体(RAGE)、核因子-κB(NF-κB)反义RNA单/双基因共表达载体.方法从人脐静脉内皮细胞ECV304中提取总RNA,RT-PCR扩增RAGE基因片段;从糖尿病人外周血单核细胞提取总RNA,RT-PCR扩增NF-κB p65基因片段.分别克隆入PGEM-T载体,酶切鉴定阳性克隆,再经PCR反应获得多量的RAGE,NF-κB 基因片段,反向插入双启动子真核表达载体pBudCE 4.1,构建RAGE、NF-κB反义RNA单/双基因共表达载体.结果 RT-PCR扩增出RAGE基因片段328 bp,扩增出NF-κB p65基因片段364 bp.测序分析证实目的基因片段正确反向插入3个重组载体.结论 RAGE、NF-κB反义RNA单/双基因共表达载体构建成功.
作者：游捷；黄清玲；林旭；刘礼斌；林建银
来源：福建医科大学学报 2005 年 39卷 2期
