目的 研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因Asn803位点在人骨髓间充质干细胞(hMSCs)分化成心肌细胞中的作用.方法 将重组腺病毒Ad-LacZ、Ad-HIF-1αnative、Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402及Ad-HIF-1α564/803分别以最佳转染复数转染体外5-氮胞苷(5- aza)诱导的hMSCs,于诱导培养后第6周,(1)提取细胞浆蛋白,应用酶联免疫分析检测心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量,Western blot测定HIF-1α及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平;(2)更换含有120 μmol/L姜黄素的心肌细胞诱导液培养1 h,后用心肌细胞诱导液继续培养11 h,接着用RT-PCR检测细胞中VEGF mRNA表达水平的变化.结果 hMSCs 经5-aza 诱导6周后,对照组、Ad-LacZ组、Ad-HIF-1αnative组、Ad-HIF-1α564组、Ad-HIF-1α564/402组及Ad-HIF-1α564/803组cTnI值分别为0.690±0.019、0.699±0.007、0.736±0.007、0.748±0.008、0.771±0.008及0.814±0.012(P<0.05),其中以Ad-HIF-1α564/803组cTnI表达水平最高(P<0.05).Western blot结果显示:与Ad-LacZ组相比,Ad-HIF-1αnative组、Ad-HIF-1α564组、Ad-HIF-1α564/402组、Ad-HIF-1α564/803组HIF-1α及VEGF蛋白均明显升高(P<0.05),其中以Ad-HIF-1α564/402组HIF-1α蛋白表达水平最高(P<0.05),以Ad-HIF-1α564/803组VE
作者:刘城;吴平生;王月刚;裴静娴;赖艳娴
来源:广东医学 2014 年 35卷 1期