目的 构建、表达和鉴定抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体--碱性磷酸酶(AP)融合蛋白.方法 用SfiⅠ和Not Ⅰ分别酶切抗转铁蛋白受体scFv表达质粒pUC19/119,获得scFv基因,直接亚克隆到表达载体pDAP2中,在TG1菌中表达scFv-AP融合蛋白,SDS-PAGE分析scFv-AP的分子量,酶免疫测定鉴定其抗体和酶活性.结果 scFv-AP融合蛋白表达载体经scFv特异性引物PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳可见约700 bp条带,符合scFv基因理论值大小,IPTG诱导产物经SDS-PAGE分析可见约为75ku的蛋白条带,符合scFv-AP融合蛋白分子量的理论值大小,直接细胞ELISA测定证明表达产物scFv-AP融合蛋白具有结合人TfR和AP活性的双重功效.结论 抗人scFv-AP融合蛋白表达载体构建成功,表达产物具有结合人TfR和AP活性的双重功效,为其临床检测应用奠定了基础.
作者：肖代雯；黄宇；沈昕；邢薇；刁智娟；刘静；雷萍；陶娟；沈关心
来源：医学分子生物学杂志 2006 年 3卷 4期
