目的：分离及鉴定与白血病多药耐药性相关的差异表达基因。方法采用抑制性差减杂交（SSH）技术分离非耐药细胞株 K562与耐药细胞株 K562／DOX 差异表达基因。提取总 RNA ，逆转录合成 cDNA ，经限制性内切酶 Rsa Ⅰ酶切后，分别与不同的接头（adopter1和 adopter2R）连接；连接产物插入 pMD19-T 载体后转入大肠埃希菌中，构建 cDNA 差减文库；挑取阳性克隆提取质粒进行测序及同源序列分析，确定差异表达基因。结果筛选获得220个差异表达基因，包括血红蛋白、核糖体和线粒体等相关基因，以及热休克因子结合蛋白（HSPB1）基因等其他基因。结论采用 SSH 技术及分子克隆技术可构建耐药及非耐药肿瘤细胞株差异表达基因的差减 cDNA 文库，能够为进一步筛选、克隆肿瘤细胞多药耐药性相关差异表达基因奠定基础。
作者：王楠；潘喆；袁宏
来源：国际检验医学杂志 2016 年 37卷 6期
