目的 建立高效表达全人源抗人肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体受体(TRAIL)-R1单克隆抗体(TR1-404)蛋白体系,并评价TR 1-404抗体蛋白功能特性.方法 构建pcDNA3.4载体抗体质粒,转染Expi293 FTM细胞,表达抗体蛋白.收集细胞培养上清,使用ProteinA/G纯化抗体蛋白.利用双抗体夹心和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体蛋白浓度及特异性.流式细胞分析检测TR1-404与Hela细胞和HCT116细胞表面TRAIL-R1的结合能力.MTT法检测在不同时间点TR1-404、TRAIL及二者联合作用对Hela细胞和HCT116细胞生存和增殖的影响.Annexin V/PI双染色检测Hela细胞和HCT116细胞凋亡.结果 成功构建pcDNA3.4载体抗体质粒和建立Expi293 FTM细胞蛋白高效表达系统.精制的TR1-404抗体既与重组TRAIL-R1抗原特异性结合,也能与Hela和HCT116细胞表面的TRAIL-R1结合.发现TR1-404联合TRAIL作用于Hela细胞,肿瘤细胞凋亡效果显著提高.而在HCT116细胞中,TRAIL与TR1-404的联合作用未见显著提高.结论 成功建立抗体蛋白高效表达系统.TR1-404抗体特异性与TRAIL-R1抗原结合.TR1-404抗体提高TRAIL诱导的Hela细胞凋亡作用.本研究为TRAIL-R1靶向的抗肿瘤治疗研究提供新方法.
作者：石佳宁；韩晓健；吕福莲；毕冬梅；金艾顺
来源：国际免疫学杂志 2015 年 38卷 5期
