目的:利用AdEasy腺病毒载体系统构建G蛋白信号调节蛋白5(regulator of G-protein signaling 5，RGS5)重组腺病毒载体，初步探讨RGS5在神经元发育过程中的作用。方法:以C57BL/6小鼠大脑皮层神经元cDNA为模板，利用PCR扩增RGS5基因，构建腺病毒重组质粒pAD-Track-RGS5。重组质粒pAD-Track-RGS5经PacI酶切线性化后与pADEasy-1骨架质粒共同转化BJ5183感受态细胞，筛选重组成功的质粒，命名为pAD-RGS5。用293A细胞包装重组腺病毒AD-RGS5，并纯化病毒，以pAD-Track包装的腺病毒(AD-EGFP)作为对照组检测重组腺病毒RNA水平RGS5表达情况。将重组腺病毒AD-RGS5感染培养的原代皮层神经元，以AD-EGFP作为对照组检测RGS5对原代皮层神经元发育的影响。结果:与Neuro 2a、CATH.a和C17.2细胞系比较，大脑原代皮层神经元RGS5相对表达量明显升高，差异具有统计学意义( t值分别为7.40、7.58和7.60， P值均<0.05)。pAD-Track-RGS5转染Hela细胞中RGS5表达量较pAD-EGFP组明显升高，差异显著具有统计学意义( t＝7.58， P<0.05)，成功构建了过表达RGS5基因的腺病毒载体。与AD-EGFP腺病毒组相比，AD-RGS5腺病毒组神经元对突触囊泡内吞的能力变弱，荧光染色变弱，差异具有统计学意义( t＝5.372，

作者：赵崴；刘传亮；徐昊；李高驰；王金彩

来源：国际免疫学杂志 2022 年 45卷 1期