目的 表达纯化新疆出血热病毒(XHFV)糖蛋白的2个结构域GcⅠ和GcⅡ,研究其免疫原性及对小鼠免疫应答的影响.方法 构建pET28a-GcⅠ和pET32a-GcⅡ原核表达质粒,分别转化大肠杆菌BL21,并优化rGcⅠ和rGcⅡ蛋白的表达和纯化条件.采用蛋白质印迹法(Western Blot)和酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测融合蛋白的抗原性.通过蛋白免疫和核酸初免-蛋白加强免疫2种方式免疫BALB/c小鼠,将小鼠按随机数字表法分为5组:pVAX1-GcⅠ+rGcⅠ组、pVAX1-GcⅡ+rGcⅡ组、rGcⅠ组、rGcⅡ组和生理盐水组(对照组),每组7只.采用间接ELISA检测小鼠血清抗体效价,同时通过脾T淋巴细胞增殖实验和细胞因子含量测定对免疫效果进行评价.结果 纯化获得融合蛋白rGcⅠ和rGcⅡ,两者能与绵羊阳性血清反应,具有较好的抗原性.3次免疫小鼠后,各实验组小鼠血清中的IgG水平明显高于对照组(均P<0.001),血清抗体效价均达到1:12800以上,其中rGcⅡ和pVAX1-GcⅡ+rGcⅡ组脾细胞培养上清中Th2型细胞因子白细胞介素-4(IL-4)的质量浓度明显高于对照组[(79.97±7.47)ng/L比(24.29±3.81)ng/L,(61.43±9.27)ng/L比(24.29±3.81)ng/L,均P<0.01];pVAX1-GcⅡ+rGcⅡ组Th1型细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)的质量浓度最高,与对照组比较差异具有统计学意义[(42.46±2.60)ng/L比(20

作者：张敬媛；汪梅芳；郭超凡；朱华兵；李轶杰；张渝疆；孙素荣

来源：国际生物医学工程杂志 2019 年 42卷 3期