目的 建立具有神经元特性的稳定表达大鼠μ阿片受体(rat mu-opioid receptor,rMOR)的PC12细胞模型.方法 构建慢病毒表达载体pBPLV-rMOR-eGFP,包装病毒,并将包装好的慢病毒感染PC12细胞,流式细胞分选术结合有限稀释法筛选稳定表达rMOR的PC12细胞.以放射性配体受体结合实验检测表达受体的亲和力及表达水平,用cAMP超射分析在PC12细胞中表达的rMOR的功能特征及胍丁胺抗吗啡依赖的检测.结果 病毒感染细胞后,可见明显的荧光蛋白表达.单克隆扩大培养后,细胞生长正常.3 H-二丙诺啡与PC12-rMOR细胞中的rMOR蛋白有较好的亲和力,Kd值为(0.51±0.07)nmol/L,Bmax值为(1.58 ±0.15) pmol/mg;吗啡20 μmol/L慢性处理24h,纳洛酮10 μmol/L急性催促15 min引起cAMP升高(255 ±25.2)％,这一效应能被外源性胍丁胺剂量依赖性逆转.结论 成功建立了无α2肾上腺受体干扰、具有神经元特征、MOR与Ⅰ型咪唑啉受体稳定共表达的细胞模型,为吗啡成瘾神经分子机制及胍丁胺激活Ⅰ型咪唑啉受体抗阿片成瘾的神经分子机制研究提供良好的体外细胞研究模型.
作者：佟艳华；赵太云；吴宁；李锦
来源：国际药学研究杂志 2014 年 41卷 2期
