[目的]建立一种简单、高效、高纯度的新生小鼠海马神经元的原代培养方法.[方法]取出生24h内的C57BL/6J新生鼠,分离海马组织,采用胰蛋白酶消化加机械吹打的方法获得单个细胞,用含体积分数1％ B27及2％ Glutamax-100X、终浓度25 μmol/L Glutamate的Neurobasal-A培养基接种培养,3d后用去Glutamate成分的上述培养基换液,并加阿糖胞苷作用48 h以抑制胶质细胞增长.于倒置相差显微镜下观察细胞的生长状态,采用微管蛋白相关标志物2(MAP2)及Hoechst 33258免疫荧光染色鉴定神经元纯度.[结果]此培养方法获得的海马神经元生长状态良好,细胞形态从接种时的圆形透亮、无突起,到培养第7天后发展为神经元胞体聚集、树突发达并形成纵横交错的神经网络;经鉴定,神经元的纯度高达97.2％以上,且能稳定存活2～3周.[结论]该方法操作简单、高效,所得神经元纯度高,结果稳定.
作者：谢丽；赵树进；严华成；石磊
来源：广州中医药大学学报 2016 年 33卷 4期
