目的:研究RNA干扰(RNA interference.RNAi)对肾癌细胞多药耐药基因(MDR1)表达的抑制作用,并分析干扰前后肾癌细胞对替尼泊苷(VM-26)敏感性的变化.方法:根据MDR1基因设计3条小干扰RNA(small interfering RNA.siRNA)序列,在质粒的介导下转染肾癌A498细胞,RT-PCR法分析转染前后MDR1 mRNA表达水平,筛选出干扰效率最高的siRNA序列;进而利用慢病毒包装siR-NA重组质粒,感染A498细胞,RT-PCR法筛选沉默效果最好的细胞株进行克隆,Western bolt法检测MDR1蛋白表达水平,MTT法对比干扰前后替尼泊苷对细胞半抑制浓度(IC50)的变化.结果:3条siRNA序列均能不同程度地抑制细胞MDR1基因的表达,其中siRNA-1序列能更有效地封闭MDR1基因,使MDR1 mRNA表达水平下降67％;筛选出的稳转细胞株与未干扰细胞袜相比,MDR1蛋白表达量明显下降,并使替尼泊苷对细胞的IC50降低约79.8％,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:RNAi可抑制肾癌A498细胞MDR1基因的表达从而逆转其对替尼泊苷的耐药,使肾癌细胞化疗耐药逆转成为可能.
作者：郝怡鑫；贺铮雯；朱建华；沈茜；李秋文；肖文华
来源：海南医学院学报 2014 年 20卷 2期
